›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (5): 527-.doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2011.05.001
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邓 聪1, 曾令兵2, 张 彦2, 娄晓丽3, 何 平2, 郭晓奎2, 姜叙诚1
DENG Cong1, ZENG Ling-bing2, |ZHANG Yan2, LOU Xiao-li3, HE Ping2, GUO Xiao-kui2, JIANG Xu-cheng1
摘要:
目的 比较不同毒力的钩端螺旋体(钩体)对血管内皮细胞单层的侵袭能力和通透性改变的影响。方法 利用Transwell小室和EAhy926细胞构建完整血管内皮细胞单层模型,分别加入钩体有毒株56606v株、减毒株56606a株、腐生型PatocⅠ株、伤寒沙门菌14028菌株和大肠埃希菌 DH5α菌株,作用2、4、8 h后在暗视野显微镜下计数到达Transwell下室细菌的数量,并检测内皮细胞单层对荧光颗粒的通透性改变。56606v株和56606a株分别与EAhy926细胞共同孵育24 h,流式细胞术Annexin V和PI染色检测内皮细胞凋亡率。透射电镜下观察钩体穿透内皮细胞单层过程中的形态特征。结果 感染后2 h,56606v和14028菌株开始在下室出现,而56606a株和PatocⅠ株到4 h后才出现。随时间的延长,下室的细菌数目持续增加;感染8 h后,56606v株到达下室的数量最多,且明显多于56606a株和PatocⅠ株(P<0.05)。不同毒力的钩体均未引起内皮细胞单层通透性明显改变;流式细胞术检测表明,钩体56606v株和56606a株均未引起内皮细胞凋亡;电镜观察显示,钩体穿透内皮细胞单层主要是通过穿透内皮细胞胞体而非细胞间紧密连接处。结论 有毒株钩体对内皮细胞单层的穿透能力明显强于减毒株和腐生型钩体;不同毒力的钩体对内皮细胞单层通透性及内皮细胞凋亡无明显影响。