帕金森病细胞模型中分子伴侣介导自噬对 &alpha;-突触核蛋白低聚体水平的影响

doi:10.3969/j.issn.1674-8115.2019.03.004

上海交通大学学报（医学版） ›› 2019, Vol. 39 ›› Issue (3): 239-.doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2019.03.004

帕金森病细胞模型中分子伴侣介导自噬对 α-突触核蛋白低聚体水平的影响

杨笑 1，杜芸兰 1，白雪峰 2，朱德生 1，王飞 1，韩露 1，管阳太 1

1.上海交通大学医学院附属仁济医院神经内科，上海 200127；2.上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心儿科转化医学研究所，上海

出版日期:2019-03-28 发布日期:2019-04-28
通讯作者: 管阳太，电子信箱：yangtaiguan@sina.com。
作者简介:杨笑（1992—），女，硕士生；电子信箱： 1045202197@qq.com。
基金资助:
国家自然科学基金（ 81671247）；上海市自然科学基金（ 16ZR1420100）

Effects of chaperone-mediated autophagy on the level of α-synuclein oligomers in Parkinsons disease cell model

YANG Xiao1, DU Yun-lan1, BAI Xue-feng2, ZHU De-sheng1, WANG Fei1, HAN Lu1, GUAN Yang-tai1

1. Department of Neurology, Renji Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 200127, China; 2. Pediatric Translational Medicine Institute, Shanghai Childrens Medical Center, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 200127, China

Online:2019-03-28 Published:2019-04-28
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, 81671247; Natural Science Foundation of Shanghai,16ZR1420100

摘要/Abstract

摘要： 目的 ·探讨在泛素蛋白酶体系统（ ubiquitin proteasome system，UPS）受损的帕金森病（ Parkinsons disease，PD）细胞模型中分子伴侣介导自噬（ chaperone-mediated autophagy，CMA）对 α-突触核蛋白低聚体水平的影响。方法 ·培养稳转野生型 α-突触核蛋白的人神经母细胞瘤 SK-N-SH细胞系，加入蛋白酶体抑制剂 lactacystin构建 PD细胞模型。通过 Western blotting检测 α-突触核蛋白低聚体、溶酶体相关膜蛋白 2A型（lysosome-associated membrane protein type 2A，LAMP2A）和相对分子质量为 70 000的热休克同源蛋白（ heat-shock cognate protein of 70 kDa，HSC70）水平；使用 LAMP2A siRNA抑制 CMA功能，检测对 α-突触核蛋白低聚体水平及细胞存活率的影响；通过免疫共沉淀观察 LAMP2A与 α-突触核蛋白低聚体的相互作用。结果 · PD细胞模型中 α-突触核蛋白低聚体表达水平升高，与 CMA功能密切相关的蛋白 LAMP2A和 HSC70水平应激性增加；抑制 LAMP2A表达， α-突触核蛋白低聚体水平进一步升高，细胞存活率降低，且通过免疫共沉淀检测到 LAMP2A与 α-突触核蛋白低聚体存在相互作用。结论 · PD细胞模型中， CMA是调节 α-突触核蛋白低聚体水平的途径之一，抑制其功能可进一步增加 α-突触核蛋白低聚体水平及细胞毒性作用。

关键词: 帕金森病, &, alpha, -突触核蛋白, 低聚体, 分子伴侣介导自噬

Abstract:

Objective · To investigate the effects of chaperone-mediated autophagy (CMA) on α-synuclein oligomers level in the Parkinsons disease (PD) cell model with impaired ubiquitin proteasome system (UPS). Methods · The PD cell model was establishedadding the proteasome inhibitor lactacystin in the SK-N-SH cell line stably transfected with wild type α-synuclein. The levels of α-synuclein oligomers, lysosome-associated membrane protein type 2A (LAMP2A) and 70 kDa heat shock homologous protein (HSC70) were detected using Western blotting. CMA function was inhibited with LAMP2A siRNA, and its effects on α-synuclein oligomers and cell viability were detected. Furthermore, the interaction of LAMP2A with α-synuclein oligomers was detectedimmunoprecipitation. Results · In the PD cell model, the levels of α-synuclein oligomers, and CMA related proteins, i.e. LAMP2A and HSC70, were increased. Inhibiting the of LAMP2A further increased α-synuclein oligomers level, while it decreased cell viability. Furthermore, LAMP2A could interact with α-synuclein oligomers. Conclusion · In the PD cell model, CMA is one of the pathways regulating α-synuclein oligomers level. Inhibiting CMA function can further increase the α-synuclein oligomers level and deteriorate cell survival.

Key words: Parkinsons disease (PD), &, alpha, -synuclein, oligomers, chaperone-mediated autophagy (CMA)

中图分类号:

R592

杨笑 1，杜芸兰 1，白雪峰 2，朱德生 1，王飞 1，韩露 1，管阳太 1. 帕金森病细胞模型中分子伴侣介导自噬对 α-突触核蛋白低聚体水平的影响[J]. 上海交通大学学报（医学版）, 2019, 39(3): 239-.

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帕金森病细胞模型中分子伴侣介导自噬对 α-突触核蛋白低聚体水平的影响

Effects of chaperone-mediated autophagy on the level of α-synuclein oligomers in Parkinsons disease cell model

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