上海交通大学学报(医学版) ›› 2019, Vol. 39 ›› Issue (8): 866-.doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2019.08.010
项潇琼,罗丽颖,傅扬,顾青,唐敏
XIANG Xiao-qiong, LUO Li-ying, FU Yang, GU Qing, TANG Min
摘要: 目的 ·探讨血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)对体外培养的人 Tenons囊成纤维细胞( human Tenons fibroblast,HTF)的纤维化及其富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白( secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)表达的作用。方法 ·取斜视手术患者的 Tenons囊组织进行培养,并采用免疫荧光技术对获得的 HTF进行鉴定。采用不同浓度的 VEGF刺激培养 HTF,并依据刺激条件将 HTF分为 4组,即 0 ng/mL组、25 ng/mL组、50 ng/mL组和 100 ng/mL组。采用蛋白质印迹和实时定量 PCR分析 SPARC、Ⅰ型胶原蛋白( collagen-Ⅰ)和基质金属蛋白酶 -9(matrix metalloprotein 9,MMP-9)的表达以及胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路磷酸化活性的改变。采用细胞活力测定实验( MTS法)和划痕实验检测 HTF的增殖和迁移能力。结果 ·通过免疫荧光技术及倒置相差显微观察可以鉴定,所培养的原代细胞为 HTF。在 VEGF刺激作用下,与 0 ng/mL组相比,其他 3组 HTF中的 SPARC、collagen-Ⅰ和 MMP-9蛋白及其 mRNA表达均有所增加,HTF中 ERK通路的磷酸化活性均有所上调, HTF细胞的增殖及迁移能力亦均有所增加,且在 50 ng/mL组中影响最大。结论 · VEGF在促进 HTF纤维化的过程中伴随着细胞基质蛋白 SPARC的上调,提示 SPARC可能是这一过程的潜在调控位点。
中图分类号: