李海园1,唐 征1,施婴婴1,王 慧2,刘志伟1
LI Hai-yuan1, TANG Zheng1, SHI Ying-ying1, WANG Hui2, LIU Zhi-wei1
摘要:
目的 探讨1,25-二羟维生素D3[1,25 (OH)2D3]对脐血单核细胞来源树突状细胞(DCs)分化、成熟及凋亡的影响。方法 体外分离获得脐血单核细胞,经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白介素-4 (rhIL-4)和重组人肿瘤坏死因子-α (rhTNF-α)诱导分化为未成熟树突状细胞(iDCs)以及成熟树突状细胞(mDCs),用1,25 (OH)2D3 (10 nmol/L)干预(干预组)。采用流式细胞仪检测单核细胞来源DCs分化、成熟各阶段细胞表面分子的表达;Real-Time PCR方法检测1,25 (OH)2D3对DCs分化成熟过程中维生素D受体(VDR)和1α-羟化酶(CYP27B1) mRNA表达的影响;Annexin V-FITC和PI染色流式细胞术检测DCs的凋亡情况。另设不使用1,25 (OH)2D3干预者为对照组。结果 ①干预组iDCs表面CD14分子表达显著高于对照组(40.05% vs 5.14%,P<0.001),而CD1a和CD11c分子表达则显著低于对照组(12.73% vs 30.07%, P<0.01;91.27% vs 95.94%,P<0.05),mDCs表面CD80、CD86和HLA-DR分子表达均显著低于对照组(3.52% vs 17.75%,P<0.01;51.10% vs 69.76%,P<0.01;69.38% vs 92.35%,P<0.01)。②随着DCs的分化成熟,iDCs和mDCs的CYP27B1表达均显著高于单核细胞(P=0.005,P=0.002),而且mDCs CYP27B1的表达显著高于iDCs(P=0.01)。iDCs和mDCs的VDR表达显著低于单核细胞(P=0.01,P=0.003),但iDCs和mDCs的VDR表达差异无统计学意义(P=0.43)。③干预组iDCs的CYP27B1表达显著高于对照组(P<0.01),而VDR的表达显著低于对照组(P<0.01),但1,25 (OH)2D3对mDCs的CYP27B1和VDR表达无显著影响(P>0.05)。④FITC和PI双染后,流式细胞术检测显示:rhTNF-α刺激48 h后,干预组DCs 的早期凋亡率显著高于对照组(20.8% vs 9.23%, P<0.01);rhTNF-α刺激72 h后, 干预组DCs的晚期凋亡率显著高于对照组(19.39% vs 7.27%,P<0.01)。结论 1,25 (OH)2D3抑制了脐血单核细胞来源DCs的分化和成熟,促进脐血单核细胞来源DCs的凋亡。