%A 石一峰, 黄英如, 刘云霄, 张松, 冼华 %T 热休克蛋白70对冷冻保存大鼠坐骨神经细胞活性及异体移植后神经再生的影响 %0 Journal Article %D 2021 %J 上海交通大学学报(医学版) %R 10.3969/j.issn.1674-8115.2021.09.009 %P 1190-1196 %V 41 %N 9 %U {https://xuebao.shsmu.edu.cn/CN/abstract/article_13164.shtml} %8 2021-09-28 %X

目的·探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对冷冻保存大鼠坐骨神经细胞活性及异体移植后神经再生的影响。方法·将SD大鼠双侧坐骨神经置于DMEM培养基中,分别于37、42、45 ℃体外预处理1 h(记为37 ℃组、42 ℃组、45 ℃组),并设置未经热应激处理的对照组(Con组),每组神经36根。蛋白质印迹(Western blotting)检测各组坐骨神经中HSP70的表达。将上述4组神经于液氮冷冻保存液中保存4周,Western blotting检测主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex class Ⅰ,MHC-Ⅰ)、MHC-Ⅱ和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9的表达,流式细胞术检测坐骨神经活细胞存活情况。取冷冻保存的坐骨神经,于37 ℃、5% CO2培养7 d,Western blotting检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)的表达。用上述4组冷冻保存4周的坐骨神经和SD大鼠新鲜坐骨神经(Fresh组),移植至Wistar大鼠对应坐骨神经10 mm缺损处对其进行修复(分别为37 ℃-Allo组、42 ℃-Allo组、45 ℃-Allo组、Con-Allo组、Fresh-Allo组),并设置Wistar大鼠坐骨神经同系移植组(Fresh-Iso组),每组大鼠 6只。移植术后20周,电生理检测肌肉复合动作电位(compound muscle action potential, CMAP)和神经传导速度(nerve conduction velocity,NCV),甲苯胺蓝染色观察再生有髓神经纤维数,透射电镜观察再生神经超微结构。结果·42 ℃ 组 HSP70表达水平高于37 ℃组、45 ℃组和Con组(均P<0.05)。冷冻保存4周后42 ℃组MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达水平与37 ℃组、45 ℃组、Con组差异均无统计学意义,但42 ℃组caspase-3、caspase-9表达水平较37 ℃组、45 ℃组、Con组降低,坐骨神经细胞存活率较高(均P<0.05)。培养7 d后,42 ℃组BDNF、GDNF表达水平较37 ℃组、45 ℃组、Con组升高(均P=0.000)。移植术后20周,42 ℃-Allo组CMAP、NCV、有髓神经纤维数、髓鞘厚度均优于Con-Allo组、Fresh-Allo组(均P=0.000)。结论·HSP70高表达能减轻大鼠坐骨神经冷冻保存损伤,提高保存后神经细胞活性,促进异体移植后神经再生。