%A 孙明姝, 郭永平, 顾乐怡, 等 %T 骨形态蛋白2 siRNA靶向抑制对体外培养人脐动脉平滑肌细胞成骨样分化及钙化的影响 %0 Journal Article %D 2010 %J 上海交通大学学报(医学版) %R 10.3969/j.issn.1674-8115.2010.11.003 %P 1329- %V 30 %N 11 %U {https://xuebao.shsmu.edu.cn/CN/abstract/article_8887.shtml} %8 2010-11-25 %X

目的 研究骨形态蛋白2(BMP2)小分子干扰RNA(siRNA)靶向抑制对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)由白介素6(IL-6)诱导刺激的成骨样分化和细胞层钙化的影响。方法 以体外培养的原代HUASMC作为实验对象。建立RNA干扰(RNAi)实验平台,通过FAM标记阴性对照siRNA优化转染条件;将BMP2基因的4条候选siRNA分别转染原代HUASMC,Real-Time PCR检测BMP2 mRNA表达,筛选有效抑制siRNA。将复苏的原代HUASMC分为siRNA转染组(转染有效抑制siRNA)和模拟转染组(对照组,不转染siRNA),两组均加入重组人IL-6(rhIL-6)(10 ng/mL)刺激孵育,Real-Time PCR检测刺激孵育12、48 h时点成骨样转化相关基因BMP2、骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、骨钙素(OC)和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达。将复苏的原代HUASMC分为siRNA转染组、对照组和空白组(不予rhIL-6刺激孵育,其余处理与对照组相同),siRNA转染组和对照组均加入rhIL-6(50 ng/mL)刺激孵育,甲氧-酚酞络合酮法检测rhIL-6刺激孵育前及孵育后2、4 d时点各组HUASMC细胞层钙盐含量,以总蛋白含量校正。结果 成功建立合适的RNAi实验平台。10 ng/mL rhIL-6刺激孵育后12 h时点,siRNA转染组HUASMC BMP2和BAP mRNA表达明显低于对照组(P<0.05);刺激孵育后48 h时点,siRNA转染组OC和OPN mRNA表达显著低于对照组(P<0.05)。加入50 ng/mL rhIL-6刺激孵育前,siRNA转染组、对照组和空白组HUASMC细胞层钙盐含量比较差异无统计学意义(P>0.05);在siRNA转染组,50 ng/mL rhIL-6刺激孵育后2 、4 d时点的细胞层钙盐含量均明显低于对照组(P<0.05),刺激孵育后2 d时点的细胞层钙盐含量明显高于空白组(P<0.05)。结论 体外培养的原代HUASMC能够实现BMP2基因的siRNA靶向抑制,能显著抑制由IL-6诱导刺激的成骨样分化和钙化。