网络出版日期: 2016-11-29
Optimization of the method for sorting human lung cancer cell A549 with FACSAria Ⅱ
Online published: 2016-11-29
目的 ·通过优化流式分选人肺癌A549细胞SP亚群方法,提高SP亚群分选纯度并缩短分选时间,以提高分选活率。方法 ·制备单细胞悬液,不同终浓度维拉帕米孵育及Hoechst33342标记染色,经PI标记检测SP细胞比例。选择最佳染色浓度,100 μm喷嘴,分选速度10 μL/min,用一次分选法(纯度模式)和二次分选法(富集+纯度模式)分选SP细胞和MP细胞,比较分选后纯度和分选用时。通过二次分选法获得SP细胞和MP细胞,分别行Lyso-Tracker Red /Hoechst 33342染色共聚焦观察和成瘤实验。结果 ·经二次分选法,SP细胞纯度达到99%以上,1×108个细胞分选时间< 5.2 h。共聚焦镜下观察到SP细胞大小与MP细胞无明显差异, MP细胞的溶酶体数量较SP细胞显著增多。Hoechst 33342均能染色,细胞活率不受影响。在小鼠成瘤实验中,SP细胞成瘤体积较MP细胞显著增大。结论 · A549肺癌细胞Hoechst33342染色终质量浓度宜用6 μg/mL;采用FACSAria Ⅱ对其SP细胞进行二次分选,不仅显著提高SP细胞分选纯度,还大大缩短分选时间,细胞活率不受影响。
田烨 , 赵犇鹏 , 符蓉 , 杨洁 , 尹荟菁 . FACSAria Ⅱ分选人肺腺癌A549细胞SP亚群的方法优化[J]. 上海交通大学学报(医学版), 2016 , 36(11) : 1594 . DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2016.11.010
Key words: SP cells; cell sorting; cancer stem cells; sorting purity; sorting viability
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