沈 玥1,路丽明2,钱盈盈1,关雪晶1,齐渊元2,倪兆慧1,钱家麒1,严玉澄1
SHEN Yue1, LU Li-ming2, QIAN Ying-ying1, GUAN Xue-jing1, QI Yuan-yuan2, NI Zhao-hui1, QIAN Jia-qi1, YAN Yu-cheng1
摘要:
目的 构建小鼠Klotho基因真核表达载体,进而获得稳定表达Klotho分子的小鼠肾上皮细胞株TCMK-1。方法 应用PCR方法扩增带有FLAG标签的Klotho编码基因,并克隆至载体pCD-CXIN (CMV-MCS-IRES-Neomycin)的相应位点;经酶切及测序鉴定重组质粒,脂质体转染TCMK-1细胞,通过G418筛选得到稳定表达Klotho分子的TCMK-1细胞株;Real-Time PCR检测Klotho mRNA水平,Western blotting检测Klotho蛋白的表达。结果 将带有FLAG标签的Klotho基因重组表达载体转染至TCMK-1细胞后,经G418筛选获得TCMK-1细胞株。与对照组相比,Klotho mRNA和蛋白表达均显著升高。结论 成功构建了Klotho基因的重组表达载体,并获得了稳定表达Klotho基因的TCMK-1细胞株,为进一步研究Klotho基因和蛋白在小鼠肾上皮细胞中的作用奠定了基础。