›› 2010, Vol. 30 ›› Issue (9): 1121-.doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2010.09.024
沈 楠, 余永胜, 潘庆春, 陈小华, 臧国庆, 汤正好
SHEN Nan, YU Yong-sheng, PAN Qing-chun, CHEN Xiao-hua, ZANG Guo-qing, TANG Zheng-hao
摘要:
目的 构建乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)强制泛素(Ub)化的DNA疫苗表达质粒。方法 以BALB/c小鼠肝脏mRNA为模板,RT-PCR扩增Ub单体基因片段,并将其羧基端第76位氨基酸突变为丙氨酸;以HBV pADR为模板,PCR扩增HBcAg基因片段,并根据N末端法则将其第1位氨基酸突变为精氨酸;利用重组PCR技术拼接Ub-HBcAg融合基因,纯化后连接pUCm-T载体,酶切鉴定正确后将Ub-HBcAg片段插入真核表达质粒pcDNA3.1(-),构建重组真核表达质粒Ub-HBcAgpcDNA3.1(-),并行酶切鉴定和基因测序。结果 构建的HBcAg强制Ub化融合基因DNA疫苗经基因测序证实目的基因插入方向正确,突变与预期相符;其余基因序列与GenBank发布序列完全一致。结论 成功构建了HBcAg强制Ub化融合基因DNA疫苗。