›› 2012, Vol. 32 ›› Issue (7): 891-.doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2012.07.015
赵黎明1, 王良哲2, 娄丽蓉3, 孙光远4, 方 正1, 修清玉1
ZHAO Li-ming1, WANG Liang-zhe2, LOU Li-rong3, SUN Guang-yuan4, FANG Zheng1, XIU Qing-yu1
摘要:
目的 观察小干扰RNA(siRNA)介导的UbcH10基因沉默联合紫杉醇处理对人肺鳞癌细胞株NCI-H226细胞增殖活性和凋亡的影响。方法 化学合成针对UbcH10基因的siRNA-UbcH10序列,脂质体转染siRNA至NCI-H226细胞(siRNA转染组),转染后24 h,采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测UbcH10 mRNA和蛋白的表达水平,以未予任何转染细胞作为空白对照,以阴性序列转染细胞作为阴性对照。以紫杉醇(1 μmol/L)处理siRNA转染及未转染NCI-H226细胞(siRNA+紫杉醇组和紫杉醇组),分别于转染后24、48 h收集细胞,MTT比色法检测细胞增殖;转染后24 h收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡;以未经紫杉醇处理的siRNA转染、阴性序列转染和未予转染的NCI-H226细胞作为siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组。结果 Real-Time PCR和Western blotting检测结果显示:转染后24 h,siRNA转染组UbcH10 mRNA和蛋白的表达较空白对照组和阴性对照组显著下调(P<0.01)。MTT比色法检测结果显示,siRNA转染组细胞增殖抑制率显著高于紫杉醇组和对照组(P<0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞增殖抑制率显著高于siRNA转染组(P<0.05)。siRNA转染组细胞凋亡率显著高于紫杉醇组和对照组(P<0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞凋亡率显著高于siRNA转染组(P<0.05),紫杉醇组与对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 UbcH10基因沉默可显著增强NCI-H226细胞对于化疗药物紫杉醇的敏感性。