上海交通大学学报（医学版） ›› 2022, Vol. 42 ›› Issue (5): 578-582.doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.05.004
徐斐翔(
), 汪升, 薛明明, 童朝阳, 陈玉梅()
XU Feixiang(), WANG Sheng, XUE Mingming, TONG Chaoyang, CHEN Yumei()
摘要：
目的·探讨长链非编码RNA-B230352I09（long non-coding RNA-B230352I09，lncRNA-B230352I09）表达改变对H9C2心肌细胞增殖及周期的影响。方法·构建lncRNA-B230352I09过表达载体（pcDNA-B230352I09）和阴性对照（negative control，NC）载体（pcDNA-NC），借助阳离子脂质体Lipofectamine 3000（Lipo3000）转染液将上述构建的载体转染至H9C2心肌细胞。实验分为空白对照组、阴性对照组、lncRNA-B230352I09过表达组，分别通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RT-PCR）检测lncRNA-B230352I09的表达量，验证其转染效率；细胞计数试剂盒8（cell counting kit-8，CCK8）检测H9C2心肌细胞在450 nm波长的吸光度（optical density，OD）并绘制生长曲线；5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶（5-ethynyl-2'-deoxyuridine，EdU）标记增殖期H9C2心肌细胞并通过荧光显微镜观察增殖心肌细胞的数量；流式细胞术分析H9C2心肌细胞在不同细胞周期所占比例；RT-PCR检测H9C2细胞周期相关调控基因的表达情况。结果·与阴性对照组比较，lncRNA-B230352I09过表达组中lncRNA-B230352I09的表达水平显著升高（P＝0.000），提示lncRNA-B230352I09转染H9C2心肌细胞模型构建成功。CCK8实验显示，与阴性对照组相比，lncRNA-B230352I09过表达可显著提高H9C2心肌细胞的OD值，促进H9C2心肌细胞增殖，表现为明显的时间依赖性细胞增殖能力增强（24 h：P=0.000；48 h：P=0.000；72 h：P=0.001）；荧光显微镜观察发现，与阴性对照组相比，lncRNA-B230352I09过表达组中EdU标记阳性的H9C2心肌细胞比例明显增多；流式细胞术分析显示，和阴性对照组比较，lncRNA-B230352I09过表达组中处于S期的H9C2心肌细胞比例明显增加，G1期心肌细胞的比例下降（P＝0.000）；RT-PCR检测结果显示，与阴性对照组比较，lncRNA-B230352I09过表达组中H9C2心肌细胞周期蛋白D1（cyclin D1）和细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin dependent protein kinase 1，CDK1）的mRNA表达水平显著升高（P＝0.000）。结论·lncRNA-B230352I09通过调节cyclin D1和CDK1促进心肌细胞进入S期，增强H9C2心肌细胞增殖能力。
中图分类号:
