上海交通大学学报（医学版）

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中国高危妊娠研究的现状、问题和方向

林羿

2022 (4): 403-408.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.001

摘要 ( 1321 )

HTML ( 184 )

PDF(1151KB) ( 1076 )

随着“二孩”“三孩”生育政策的推行，以及受社会各方面因素的影响，现阶段中国高龄（>35岁）、高危孕产妇比例显著增多，孕产妇安全和孕期管理面临新问题。病理妊娠中，复发性流产发生率高，早产发生率居高不下。常见的妊娠并发症，如子痫前期和子痫的诊疗相对滞后。造成孕产妇死亡的疾病特征发生改变，其中深静脉血栓等原因造成孕产妇死亡的案例增加。流动人口增加导致该群体孕产妇发生不良妊娠结局的风险升高。辅助生殖的广泛应用导致不良妊娠结局发生风险增加。高龄产妇数量增加导致胎儿出生缺陷风险上升。因此，亟需建立更加精准的孕产妇，尤其是高龄孕产妇危险度评估标准，实行全孕期管理和规范诊治，逐步建立规范化的流产保胎诊疗方案，开发并推广可鉴别孕产妇主动脉节律、心率和胎心率的三联监护系统。应用物联网和信息自动化技术建立医院-家庭联动监护和预警系统，以助力增加出生人口数量、提高人口质量。该文阐述了在新人口政策背景下，高危妊娠研究的现状、问题和方向，为保障母婴健康提供新思路。

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难治性产后出血导致子宫切除的危险因素分析

胡佳宁, 张锦文, 刘晓瑞, 陈彩莲, 林羿

2022 (4): 409-414.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.002

摘要 ( 420 )

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PDF(1004KB) ( 196 )

目的·探讨难治性产后出血导致产科急症子宫切除的危险因素以及相关预防措施。方法·回顾性分析2014年1月—2020年12月于上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院收治的110 934例产妇的临床资料。根据收治时间，选择其中2015—2017年段（n=48 984）和2018—2020年段（n=45 262）的产妇为研究对象，分析其产科急症子宫切除发生率的情况；选择其中发生难治性产后出血的108例产妇为研究对象，根据是否行子宫切除，将其分为子宫切除组（n=22）与子宫保留组（n=86），采用单因素分析及多因素Logistic回归模型对该2组患者的临床资料进行比较分析，并探究产科急症子宫切除的危险因素。结果·与2015—2017年段相比，2018—2020年段的产科急症子宫切除发生率下降（P=0.039）；与子宫保留组相比，子宫切除组患者的年龄偏大，孕次≥2次、单胎妊娠、发生妊娠合并症（前置胎盘、胎盘植入、瘢痕子宫等）、羊水栓塞者的占比均较高，产后出血量更大（均P<0.05）。多因素Logistic回归分析显示，患者的年龄、产后出血量均是难治性产后出血导致产科急症子宫切除的独立危险因素（P<0.05）。结论·难治性产后出血产妇的年龄越高、出血量越大，越容易导致产科急症子宫切除的发生。临床上需尽早开展监测并进行干预，以降低该类患者产科急症子宫切除的发生率。

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产后血栓性疾病的危险因素分析

朱月悦, 张锦文, 马锐翔, 陈彩莲, 林羿, 刘晓瑞

2022 (4): 415-421.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.003

摘要 ( 529 )

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PDF(1196KB) ( 381 )

目的·探讨产后血栓形成的高危因素，为产后血栓的预防提供指导。方法·回顾性分析2018—2020年间于上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院分娩的孕产妇电子病例45 262例，其中病例组60例，为诊断为产后静脉血栓或者肺栓塞的产妇；对照组45 202例，为未发生产后血栓的产妇。通过多因素 Logistic 回归分析寻找产后血栓发生的危险因素。结果·产后静脉血栓的发病率为130/10万，肺栓塞46/10万，产后血栓性疾病的发病率呈现逐年增高的趋势（P<0.05），产后血栓的发生部位以左下肢为主。病例组产妇分娩时的平均年龄为（33.52±4.79）岁，对照组的平均年龄为（31.35±4.01）岁。病例组中发生早产的产妇占比是对照组的2.05倍，孕前超重及肥胖的产妇占比是对照组的1.94倍。多因素Logistic回归分析显示产妇年龄大（aOR=1.10，95%CI 1.04~1.17）、分娩孕周小（aOR=0.88，95%CI 0.78~0.99）、本科学历以下（aOR=2.24，95%CI 1.20~4.18）、择期剖宫产（aOR=6.68，95% CI 2.56~17.41）、急诊剖宫产（aOR=14.40，95% CI 5.37~38.63）及孕前超重和肥胖（aOR=1.91，95%CI 1.04~3.49）的产妇发生产后血栓的风险增加。结论·产妇年龄大、受教育程度低、分娩孕周小、超重以及剖宫产的分娩方式是产后血栓的独立危险因素，其中最突出的危险因素是急诊剖宫产。产后静脉血栓的发生和多种危险因素相关，且可导致孕产妇死亡，临床上需要及时做好血栓风险的评估工作，对于有高危因素的产妇尽早进行预防措施，以降低产后血栓的发生。

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妊娠期糖尿病对C57BL/6J子代成年鼠神经精神功能的影响

吴侠霏, 方婕, 漆洪波, 余昕烊

2022 (4): 422-432.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.004

摘要 ( 630 )

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PDF(5175KB) ( 296 )

目的·探究妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）对C57BL/6J子代成年鼠神经精神功能的影响。方法·将8周龄C57BL/6J小鼠随机分为GDM组和对照组，采用高脂饮食（high fat diet，HFD）诱导GDM模型，通过检测孕鼠空腹血糖、口服糖耐量实验（oral glucose tolerance test，OGTT）及胰岛素耐量实验（insulin tolerance test，ITT）指标验证模型是否诱导成功。子代正常饮食喂养至18周，进行开放旷场实验（open field test，OFT）、高架十字迷宫实验（elevated plus maze test，EPMT）、高架零迷宫实验（elevated zero maze test，EZMT）、强迫游泳实验（forced swimming test，FST）、悬尾实验（tail suspension test，TST）、糖水偏好实验（sucrose preference test，SPT）检测子代情绪行为。收集小鼠海马组织进行组织学验证。利用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，H-E）染色、镀银染色明确GDM组子代海马组织结构形态，免疫荧光染色检测神经元及星形胶质细胞标志阳性的细胞数量。利用实时定量PCR（real time quantitative PCR，RT-qPCR）检测海马区域多巴胺（dopamine，DA）、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）、脑源性神经因子（brain-derived neural factor，BDNF）及cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element-binding protein，CREB）相关基因（Drd1、Htr2a、Bdnf、Creb1）的表达。多组间比较采用单因素方差分析，2组间差异采用独立样本t检验进行分析。结果·HFD诱导的C57BL/6J小鼠GDM模型表现为OGTT各时间点血糖值、曲线下面积（area under curve，AUC）明显升高，胰岛素耐量明显降低，证实GDM模型成功建立。子代OFT、EPMT、EZMT结果显示GDM组与对照组差异无统计学意义；FST、TST及SPT结果显示GDM组不动时间明显上升、糖水偏好百分比明显降低，且F1代雌性小鼠差异更为显著（P=0.000）。RT-qPCR结果显示，与对照组相比，GDM组Drd1、Htr2a、Bdnf表达量下降。H-E及镀银染色结果分析发现，GDM组海马组织结构没有明显变化，但免疫荧光结果提示GDM组神经元、星形胶质细胞数目下降。结论·GDM与C57BL/6J子代成年鼠神经精神障碍相关，其主要表现为子代成年期抑郁症倾向，不表现为焦虑症倾向。

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应用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统研究B细胞中转录因子T-bet的调控作用

韩夏夏, 顾霜霜, 戴黛, 沈南

2022 (4): 433-442.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.005

摘要 ( 654 )

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PDF(4499KB) ( 583 )

目的·通过优化后的CRISPR/Cas9基因编辑系统，研究原代B细胞中转录因子T-bet对抗体类别转换的调控作用。方法·系统性分析GEO公共数据库中体外诱导分化的B细胞转录组测序结果，探索转录因子T-bet对抗体类别转换的调控。构建靶向基因为Tbx21（T-box 21，编码T-bet）的小向导RNA（small guide RNA，sgRNA）反转录病毒表达载体，使用Plat-E细胞系作为病毒包装细胞系获得装有sg-Tbx21质粒的反转录病毒并对其浓缩。使用B细胞受体抗体、抗CD40抗体和Toll样受体激动剂体外协同刺激Cas9转基因小鼠的脾脏B细胞，感染高滴度反转录病毒颗粒实现基因编辑。流式细胞术分选感染细胞，提取基因组DNA进行PCR扩增后对靶向序列进行测序，利用ICE CRISPR分析工具计算基因敲除效率。体外诱导B细胞分化为浆细胞，采用ELISA检测基因编辑后B细胞培养上清液中IgM、IgG2c、IgG3抗体类别的丰度，通过独立样本t检验比较sg-NC组与sg-Tbx21组细胞上清液中抗体水平的差异。结果·①经分析GEO数据库发现，γ干扰素可以诱导B细胞中Tbx21基因的表达，且在T-bet的转录调控下，B细胞展现抗体类别转换相关通路活化的转录组特征。②使用浓缩后的高滴度病毒感染激活的B细胞，可以构建高效的反转录病毒感染原代B细胞体系。③Cas9转基因小鼠原代B细胞转染sg-Tbx21质粒后成功实现Tbx21基因敲除，敲除效率约为59%。④在体外诱导B细胞分化为浆细胞的条件下，sg-Tbx21转染后的B细胞培养上清液中IgG2c水平显著降低（P=0.000），IgM和IgG3的水平无明显的变化。结论·通过浓缩反转录病毒和协同刺激激活原代B细胞的方式可提高sgRNA递送的效率，在Cas9转基因小鼠原代B细胞中敲除Tbx21基因；应用这一系统证明了T-bet敲除后阻碍了IgG2c抗体类别的产生。

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SMAD2和SMAD3在人胚胎干细胞分化过程中的不同调控作用

赵冰楠, 马双羽, 胥春龙, 王琼

2022 (4): 443-454.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.006

摘要 ( 1116 )

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PDF(8922KB) ( 457 )

目的·探究转化生长因子β（transforming growth factor β，TGFβ）家族下游的关键转录因子SMAD蛋白（drosophila mothers against decapentaplegic protein）——SMAD2和SMAD3在人胚胎干细胞（human embryonic stem cell，hESC）体外分化过程中的不同作用。方法·在hESC中，通过蛋白质印迹法（Western blotting）检测SMAD2和SMAD3在分化过程中的蛋白表达水平。通过CRISPR/Cas9（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9）技术构建SMAD2敲除（SMAD2 knockout，SMAD2KO）和SMAD3敲除（SMAD3 knockout，SMAD3KO）的细胞系。利用免疫荧光染色检测SMAD蛋白丢失对多能性因子八聚体结合转录因子4（octamer-binding transcription factor 4，OCT4）和性别决定区Y框蛋白2（sex determining region Y-box 2，SOX2），神经外胚层（neuroectoderm，NE）标志因子配对盒因子6（paired box 6，PAX6）和性别决定区Y框蛋白1（sex determining region Y-box 1，SOX1）以及中内胚层（mesendoderm，ME）标志因子SOX17的表达影响；同时使用流式细胞术鉴定SMAD2敲除或SMAD3敲除对NE标志因子PAX6以及ME标志因子SOX17、脱中胚蛋白（eomesodermin，EOMES）和C-X-C模体趋化因子受体4（C-X-C motif chemokine receptor 4，CXCR4）表达的影响。在SMAD2KO和SMAD3KO细胞中分别过表达SMAD2和SMAD3质粒，通过Western blotting检测SMAD2和SMAD3蛋白回补的效果，并利用实时定量PCR（real-time quantitative reverse transcription PCR，qRT-PCR）检测SMAD蛋白回补后对分化过程中的ME关键因子EOMES、叉头框转录因子A2（forkhead box A2，FOXA2）和GSC同源盒（goosecoid homeobox，GSC）表达的影响。结果·虽然SMAD2和SMAD3的蛋白序列较为相似，但是SMAD2才是hESC中主要表达的蛋白因子。免疫荧光染色结果表明，SMAD2敲除和SMAD3敲除并不会影响hESC多能性因子OCT4和SOX2的表达；同时流式细胞术发现，SMAD蛋白的缺失也不会影响NE标志因子PAX6和SOX1的表达。SMAD3敲除对hESC向ME分化没有显著的影响，而SMAD2敲除严重阻碍了hESC表达ME标志因子SOX17、EOMES和CXCR4。通过qRT-PCR检测显示在SMAD2KO细胞中过表达外源性SMAD2可以有效地恢复ME基因EOMES、FOXA2和GSC的表达，而在SMAD3KO细胞中回补SMAD3对这些ME基因的表达无影响。结论·SMAD2和SMAD3在hESC向ME分化过程中的调控作用不同。SMAD2而非SMAD3是决定hESC表达ME基因的关键。

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核小体重塑及组蛋白去乙酰化酶复合物的负染电镜结构分析

段昱娟, 黄晶

2022 (4): 455-463.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.007

摘要 ( 586 )

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PDF(3787KB) ( 300 )

目的·利用负染电镜技术分析人源核小体重塑及组蛋白去乙酰化酶复合物（nucleosome remodeling and deacetylase complex，NuRD复合物）结构，获得人源NuRD复合物的轮廓信息。方法·将C端带有3×Flag标签的MBD3（methyl-CpG binding domain protein 3）和N端带有10×His标签的GATAD2A（GATA zinc finger domain containing 2A）克隆至pMLink表达载体中，采用聚乙烯亚胺瞬时转染过表达的方式在人源Expi293F悬浮细胞里表达NuRD复合物中的蛋白质组分；依次通过Ni-NTA亲和层析、Flag（DYKDDDDK）标签亲和层析和Superose 6 Increase 5/150凝胶过滤层析分离纯化NuRD复合物；利用蛋白质印迹法（Western blotting）和液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）对复合物进行组分鉴定；利用负染电镜技术结合单颗粒重构技术研究NuRD复合物的空间结构；通过UCSF Chimera软件将蛋白质数据库（Protein Data Bank，PDB）中已有亚复合物的原子结构模型（7AO9，5FXY）与生成的结构模型进行自动匹配及比对，预测多个蛋白组分在负染结构模型中的定位。结果·利用两步亲和层析，成功富集了带有纯化标签的MBD3、GATAD2A蛋白及其他内源蛋白组分，通过进一步的凝胶过滤层析分离得到了均一性良好的复合物；通过Western blotting和LC-MS/MS鉴定，确认纯化得到的复合物为组分完整的人源NuRD复合物。利用负染电镜技术及单颗粒重构技术初步解析了NuRD复合物的空间结构，其整体轮廓特征明显，呈现为不对称的长条形；通过进一步的三维优化处理，最终获得了人源NuRD复合物分辨率约为17 ?（1 ?=0.1 nm）的初步三维结构模型；已有的亚复合物原子结构模型（PDB：7AO9，5FXY）与NuRD复合物的初步三维结构模型自动匹配后，初步确定了MTA1/2/3（metastasis-associated protein 1/2/3）、HDAC1/2（histone deacetylase 1/2）、RBBP4/7（retinoblastoma-binding protein 4/7）及MBD2/3（methyl-CpG-binding domain protein 2/3）蛋白亚基在NuRD复合物负染结构模型中的定位。结论·利用单颗粒重构技术搭建了人源NuRD复合物的低分辨率负染结构模型。

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基于GEO数据库探索miRNA靶基因通过泛素化参与食管鳞状细胞癌

靳步, 袁颖, 陈婉玉, 徐浒东, 黄晓蕾, 何佳璐, 于红

2022 (4): 464-471.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.008

摘要 ( 637 )

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目的·筛选食管鳞状细胞癌疾病过程中新的潜在致病基因。方法·通过GEO数据库获取miRNA芯片GSE122497和GSE164174的数据，利用GEO2R分别筛选出食管鳞状细胞癌患者和健康人的差异miRNA，Venn diagram webtool 工具取交集；采用Target Scan工具及DIANATOOLS工具预测差异miRNA的靶基因，取2款工具的预测靶基因交集进行基因功能分析；利用STRING工具分析靶基因的蛋白质相互作用并选取Hub基因。结果·①芯片中共计108个差异miRNA。②取Target Scan工具和DIANATOOLS工具的交集后，共有1 354个差异靶基因。③基因本体（Gene Ontology，GO）分析结果表明，差异靶基因的基因功能显著富集于DNA模板转录调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控等生物过程，RNA聚合酶Ⅱ核心启动子近端序列特异性DNA结合、蛋白结合、金属离子结合等分子功能；主要存在于细胞核、核质、细胞质等细胞成分。按照富集的基因数目降序排列，京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）分析结果表明上述基因显著富集于肿瘤通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、干细胞多能性调控信号通路等。④蛋白质相互作用网络共有1 326个节点，2 300条边，平均节点连接度为3.47。筛选出的Hub基因：SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶2（SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 2，SMURF2）、β-转导重复蛋白E3泛素蛋白连接酶（β-transducin repeat containing E3 ubiquitin protein ligase，BTRC）、SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1（SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1，SMURF 1）、泛素结合酶E2 D1（ubiquitin conjugating enzyme E2 D1，UBE2D1）、E3泛素连接酶枯灵素2（cullin 2，CUL2），以往研究表明上述基因与泛素化有关。结论·经GEO数据库筛选出的SMURF2、BTRC、SMURF1、UBE2D1、CUL2基因可能通过靶向调控蛋白的泛素化参与食管鳞状细胞癌的疾病过程。

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多组学数据解析循环及浸润性B细胞在结直肠癌免疫微环境中的作用

龚其雨, 陈磊

2022 (4): 472-481.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.009

摘要 ( 666 )

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目的·探究循环及浸润性B细胞亚群在结直肠癌免疫微环境中的作用，探寻B细胞发育的潜在驱动机制，分析免疫微环境中B细胞与其他免疫细胞的互作关系及通信分子的功能，并寻找可能的调控途径以促进B细胞的抗肿瘤效应。方法·收集3例结直肠癌患者的癌旁（正常）、肿瘤和外周血共计9份样本，分别制备单细胞悬液。通过多色流式细胞仪分选免疫细胞后，利用10X Genomics平台进行单细胞转录组和B细胞受体组库（B cell receptor repertoire，BCR）测序，并使用Seurat等生信工具进行数据分析，从肿瘤与正常组织中B细胞的浸润数量及功能方面的差异、B细胞亚群与T细胞以及与髓系细胞亚群的互作关系、B细胞亚群的转录因子调控网络等角度进行探索分析。结果·与正常组织相比较，CD20⁺B细胞亚群在肿瘤组织中的浸润数量显著上升；其中，以生发中心B细胞（germinal center B cells，GCB）的作用最突出，发生积极的克隆扩增和重链突变水平的提升，并且向记忆B细胞分化的趋势增加。然而，浆细胞在肿瘤微环境中的数量大幅减少，以分泌IgA类抗体的浆细胞减少最为明显。此外，相较正常组织的免疫微环境，肿瘤组织中的GCB细胞与T细胞等其他免疫细胞的联系变得更加紧密，正向调控免疫功能的通信分子对显著富集。结论·GCB在结直肠癌肿瘤微环境中的作用大幅提升，以自身显著提升的重链突变水平来提高其对肿瘤抗原的亲和力，同时和微环境中的免疫细胞联系增强，发挥着积极的抗肿瘤效应。

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基于垂直密度梯度离心全自动血脂谱检测法的家族性高三酰甘油血症家系血脂亚组分分析

何志洁, 何津春, 张燕培, 王耀东, 王占科

2022 (4): 482-489.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.010

摘要 ( 585 )

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目的·分析家族性高三酰甘油血症（familial hypertriglyceridemia，FHTG）家系成员血脂亚组分的特征。方法·收集兰州大学第一医院1个符合FHTG家系诊断标准的FHTG家系，纳入该家系13位成员，根据家系成员三酰甘油（triacylglycerol，TAG）水平是否升高（≥2.26 mmol/L）分为高TAG组（n=7）和对照组（n=6）。通过面对面的调查，收集家系成员的年龄、性别、身高、体质量、体质量指数（body mass index，BMI）、腰围、生活习惯及病史等一般资料，并根据调查结果绘制家系系谱图。家系成员空腹8~12 h后，采集外周静脉血样本进行生化项目检测，并采用垂直密度梯度离心全自动血脂谱检测法（vertical auto profile，VAP）测定研究对象血清血脂亚组分，主要包括TAG、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、低密度脂蛋白［low-density lipoprotein，LDL］、极低密度脂蛋白（very-low-density lipoprotein，VLDL）、极低密度脂蛋白3（very-low-density lipoprotein 3，VLDL₃）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、高密度脂蛋白2（high-density lipoprotein 2，HDL₂）、高密度脂蛋白3（high-density lipoprotein 3，HDL₃）、中间密度脂蛋白、脂蛋白残粒、脂蛋白a、非高密度脂蛋白；VAP基于LDL最大时间值分析LDL密度模式。用垂直脂蛋白图谱法（vertical lipoprotein profile，VLP）检测研究对象血清低密度脂蛋白颗粒（low-density lipoprotein particle，LDL-P）。采用独立样本t检验比较对照组和高TAG组血脂亚组分水平的差异。结果·FHTG家系高TAG组的身高、体质量、BMI和腰围显著高于对照组（P=0.022，P=0.000，P=0.001，P=0.000）。2组间性别差异有统计学意义（P=0.029），年龄差异无统计学意义（P=0.561）。高TAG组TAG、VLDL、VLDL₃、LDL-P水平均高于对照组（P=0.003，P=0.033，P=0.020，P=0.043），HDL-C、HDL₂、HDL₃水平均低于对照组（P=0.000，P=0.001，P=0.001）。高TAG组LDL密度模式均为小而密，而对照组LDL密度模式为混合或大而疏。其他指标之间的差异没有统计学意义。结论·除临床常用的TAG、HDL-C外，VLDL、VLDL₃、LDL-P、小而密LDL、HDL₂、HDL₃有望成为FHTG诊断和治疗的指标。

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阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征合并高血压患者的呼吸紊乱指数与动脉硬化的相关性研究

唐碧雯, 白娅娅, 胡月亮, 晁慧娟, 王潜, 左君丽

2022 (4): 490-495.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.011

摘要 ( 410 )

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目的·探究呼吸紊乱指数（apnea hyponea index，AHI）对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS）合并高血压患者动脉硬化的影响。方法·选择2018年7月—2020年12月于上海交通大学医学院附属瑞金医院老年病科住院且行多导睡眠监测的OSAHS患者，收集患者临床及实验室指标，同时行24 h动态血压监测及颈动脉-股动脉脉搏波传导速度（carotid-femoral pulse wave velocity，c-fPWV）测定。将患者根据AHI进行分组，5次/h<AHI<15次/h为轻中度OSAHS组，AHI≥15次/h为中重度OSAHS组。采用Logistic回归分析AHI与动脉硬化及心血管疾病危险因素包括年龄、体质量指数（body mass index，BMI）、夜间收缩压、夜间舒张压、低密度脂蛋白、空腹血糖、估算肾小球滤过率、是否使用他汀类及降糖药物的相关性。结果·共纳入365例患者，平均年龄（49.1±12.8）岁，326例（89.3%）为男性，BMI为（28.1±3.8）kg/m²。中重度OSAHS组患者257例，轻中度OSAHS组患者108例。中重度OSAHS组BMI、c-fPWV、空腹血糖和糖化血红蛋白（ HbA1c）水平均显著高于轻中度OSAHS组（均P<0.05）；AHI与c-fPWV呈显著正相关（R²=0.047，P=0.001）。在291例OSAHS合并高血压患者中，中重度OSAHS患者（216例）c-fPWV、空腹血糖和HbA1c水平显著高于轻中度OSAHS患者（75例），差异有统计学意义（均P<0.05）。经校正年龄、BMI、AHI、夜间收缩压、夜间舒张压、低密度脂蛋白、空腹血糖、估算肾小球滤过率、是否服用他汀类及降糖药物，Logistic回归结果显示，AHI（OR=1.032，95% CI 1.009~1.055，P=0.006）、年龄（OR=1.078，95% CI 1.021~1.138，P=0.007）、夜间收缩压（OR=1.058，95% CI 1.010~1.109，P=0.017）为c-fPWV升高的独立危险因素。结论·OSAHS合并高血压患者AHI升高，发生动脉硬化的风险增加。

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前列腺癌患者血液中PSA、TAP、MACC1的表达及其诊断价值

王慧, 赵莹, 温丽蓉, 曹军, 羊继平, 原永明

2022 (4): 496-501.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.012

摘要 ( 740 )

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目的·探讨前列腺癌患者血液中前列腺特异抗原（prostate specific antigen，PSA）、肿瘤异常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）及结肠癌转移相关基因1（colon cancer metastasis related gene 1，MACC1）的表达及临床诊断价值。方法·以2019年1月至2020年12月于上海市徐汇区大华医院就诊的107例前列腺癌患者为病例组，另选择同期该院60名健康体检者为对照组。回顾性分析2组患者血液中PSA、TAP及MACC1的水平，及其与Gleason评分、T分期的相关性；采用受试者操作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评价各项指标诊断前列腺癌的灵敏度和特异度。结果·病例组患者血液PSA、TAP及MACC1水平均显著高于对照组（P<0.05）；随着 Gleason 分级的升高，病例组患者血液PSA、TAP及MACC1水平逐渐升高；随着T分期的进展，病例组患者血液PSA、TAP及MACC1水平逐渐升高；有淋巴结转移的患者血液PSA和MACC1水平高于无淋巴结转移患者，TAP水平低于无淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（P<0.05）。血液PSA诊断前列腺癌的ROC曲线下面积（area under the curve，AUC）为0.764，灵敏度为86.12%，特异度为88.63%，截断值为6.01 μg/L；血液TAP诊断前列腺癌的AUC为0.796，灵敏度为88.18%，特异度为89.58%，截断值为135.62 μm²；血液MACC1诊断前列腺癌的AUC为0.873，灵敏度为78.46%，特异度为80.10%，截断值为37.80 pg/mL；3项指标联合检测的AUC 为0.941，灵敏度为93.15%，特异度为94.08%，均高于各单项指标（P<0.05）。Spearman相关分析结果显示，血液PSA、TAP及MACC1水平均与Gleason评分呈正相关（r值分别为0.648、0.513和0.501，均P=0.000），与T分期呈正相关（r值分别为0.616、0.537和0.542，均P=0.000）。结论·前列腺癌患者血液PSA、TAP及MACC1水平均与Gleason评分、T分期之间关系密切，对前列腺癌有一定的诊断价值；3项联合检测，诊断价值更高。

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乳腺癌化学治疗致肝损伤预测模型的构建及其评价

夏坤健, 邓林林, 王琳

2022 (4): 502-509.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.013

摘要 ( 528 )

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目的·分析乳腺癌化学治疗（化疗）致肝损伤的危险因素，构建乳腺癌化疗致肝损伤的预测模型并对其进行评价。方法·以2019年4月至2021年9月在南昌大学第二附属医院接受蒽环类联合环磷酰胺序贯紫杉醇类±曲妥珠单抗化疗方案的乳腺癌患者为研究对象，分为肝损伤组与未损伤组。采用χ²检验及二元Logistic回归分析化疗致肝损伤的危险因素并建立预测模型。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评价回归模型的预测效能并对其进行外部验证。结果·入选符合纳入标准的乳腺癌患者207例。其中，肝损伤组患者69例（33.3%），未损伤组138例。2组间的化疗方案（χ²＝44.851，P=0.000）、感染乙肝病毒（χ²＝16.682，P=0.000）、既往高血压病史（χ²＝13.211，P＝0.004）、肿瘤TNM分期（χ²＝14.422，P＝0.001）、既往糖尿病史（χ²＝4.839，P＝0.028）、化疗前白蛋白水平低下（χ²＝10.073，P＝0.002）以及三酰甘油升高（χ²＝39.367，P=0.000）的差异存在统计学意义。二元Logistic回归分析显示，化疗方案（OR＝4.734，95%CI为1.687~13.283，P＝0.003）、感染乙肝病毒（OR＝4.530，95%CI为1.806~11.366，P＝0.001）、肿瘤TNM分期Ⅲ期（OR＝5.304，95%CI为1.802~15.608，P＝0.002）、既往糖尿病史（OR＝3.041，95%CI为1.196~7.729，P＝0.019）以及化疗前白蛋白水平低下（OR＝3.744，95%CI为1.413~9.920，P＝0.008）是化疗致肝损伤的独立危险因素。Logistic回归模型：logit（P）=-3.471+1.511 $?$ X1+1.112 $?$ X2+1.320 $?$ X3+0.755 $?$ X4+0.691 $?$ X5+0.973 $?$ X6+1.258 $?$ X7+0.741 $?$ X8+1.668 $?$ X9+1.555 $?$ X10。ROC曲线下面积为0.874，标准误0.024，95% CI为0.827~0.922，P=0.000。外部验证显示，预测模型特异度为86.9%，灵敏度76.9%；阳性预测值为71.4%，阴性预测值为89.8%；准确度为83.9%；Kappa值为0.624，标准误为0.091，P=0.000。结论·此Logistic回归模型具有较高的预测效能，对预测患者是否出现肝损伤有一定的参考价值。

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哺乳动物细胞表面展示IgG抗体Fc组合突变库的构建及评估

张咪, 柳淑君, 李福彬, 张燕

2022 (4): 510-517.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.014

摘要 ( 673 )

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PDF(1276KB) ( 359 )

目的·在单点突变文库筛选结果和多个简并引物引入组合突变的基础上，建立一种高效获得高通量的哺乳动物细胞膜表面展示IgG抗体Fc（fragment crystallizable domain）组合突变文库的方法。方法·单点突变文库经流式细胞术分选获得与Fcγ受体IIB（FcγRIIB）高亲和力的位于EU编号233~240位点的氨基酸突变；根据这些突变设计多个简并引物，将引物等比混合或按引物所包含突变多样性占比混合后进行PCR获得含有组合突变的DNA片段；利用重组酶连接片段与载体后转化大肠埃希菌DH5α，获得质粒文库；质粒文库转染Pheonix细胞，制备反转录病毒，然后感染3T3细胞，获得细胞表面表达有Fc突变的细胞文库；使用流式细胞术检测质粒转染Pheonix细胞的效率，以及病毒感染3T3细胞的效率；高通量测序评估质粒文库和细胞文库的构建情况。结果·根据单点突变文库筛选结果，设计32条简并引物，可以覆盖所有期望的组合突变，并且实际文库多样性为期望文库的3.6倍（41 600/11 520）；高通量测序结果显示，相较于引物等比混合获得的质粒文库，按引物所包含突变多样性占比混合所获得的质粒文库具有更好的均一性与完整性，能够覆盖期望文库中99.58%的组合突变类型（11 472/11 520）；一代测序结果显示，10条序列中有3条为期望文库突变，与简并引物设计时计算的多样性相符；流式细胞术的结果显示，Pheonix细胞的转染效率为51.6%，3T3细胞的感染效率为47.4%；高通量测序结果显示，所获得的细胞文库能够覆盖期望文库中85.92%的组合突变（9 898/11 520）。结论·在已有单点突变文库筛选的氨基酸突变基础上设计多个简并引物，并通过PCR、质粒转染和反转录病毒感染，能够高效、低成本地获得文库覆盖率超过85%的抗体Fc组合突变质粒文库和哺乳动物细胞表面展示文库。

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抗体基因点突变、插入和缺失体外检测方法的建立及应用

罗思敏, 叶菱秀, 郝茜

2022 (4): 518-527.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.015

摘要 ( 780 )

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目的·建立由激活诱导胞苷脱氨酶（activation-induced cytidine deaminase，AID）引起的体细胞高频突变过程中，快速检测抗体基因可变（variable，V）、多样（diversity，D）、连接（joining，J）区发生突变（包括点突变、插入和缺失事件）的体外方法。应用该方法检测经2种DNA聚合酶β（polymerase β，Polβ）抑制剂处理的细胞中抗体基因VDJ片段的突变情况。方法·用慢病毒感染法处理CH12F3细胞（即处理组），感染前的CH12F3细胞为对照组。采用蛋白质印迹法（Western blotting）检测2组细胞中AID的表达水平。构建高通量测序文库，应用生物信息学的方法分析处理组和对照组细胞中抗体基因VDJ片段的点突变、插入及缺失频率。采用不同浓度的Polβ抑制剂［扎西他滨（2'，3'-dideoxycytidine，DDC）、5-甲氧基黄铜（5-methoxyflavone，5-MF）］处理CH12F3细胞，并采用台盼蓝拒染法测定该2种抑制剂对细胞增殖的影响。分别以筛选得到的DDC浓度、5-MF浓度处理CH12F3细胞（即实验组），以0.9% NaCl处理的细胞及DMSO处理的细胞依次记为上述实验组的对照组，使用上述已建立的方法进行处理，最终行高通量测序，分析该2种抑制剂对抗体基因VDJ片段中点突变、插入及缺失频率的影响。结果·Western blotting结果显示，和CH12F3细胞对照组相比，CH12F3细胞处理组中AID表达较高；且高通量测序结果显示，该组在抗体基因VDJ片段上存在大量的点突变，且插入和缺失的频率均较高（均P=0.000）。台盼蓝拒染法检测显示，处理CH12F3细胞最适宜的DDC浓度为100 μmol/L、5-MF浓度为25 μmol/L。最终的高通量测序结果显示，和0.9 %NaCl对照组相比，经100 μmol/L DDC处理的细胞在抗体基因VDJ片段的点突变频率较低（P=0.000），长度为1 bp的缺失频率亦较低（P=0.009）；和DMSO对照组相比，经25 μmol/L 5-MF处理的细胞在抗体基因VDJ片段的点突变频率较低（P=0.000），长度大于1 bp的插入和缺失频率亦有所下降（均P=0.000）。结论·该研究建立的体外检测方法可用于分析AID引起的抗体基因VDJ片段的突变事件。Polβ抑制剂DDC和5-MF对由AID引起的抗体基因VDJ片段的突变事件具有抑制作用。

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角膜知觉重建的分类与研究进展

吴越, 张嘉莹, 王炜, 李瑾

2022 (4): 528-534.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.016

摘要 ( 674 )

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PDF(2216KB) ( 376 )

角膜神经来自三叉神经眼支，主要支配角膜的知觉。三叉神经至眼表的任一节段受损，均有可能导致角膜神经损伤，并可引起角膜知觉减退或缺失。神经营养不良性角膜病变即是因三叉神经损伤继而角膜神经的感觉及营养功能受损所致，主要表现为角膜知觉下降或缺失，并可导致角膜上皮缺损、溃疡或者穿孔。然而，神经营养不良性角膜病变发病早期多仅表现为角膜知觉的轻度下降及泪膜的不稳定，因此在临床上较为隐匿；同时，关于促进角膜神经的修复与再生、恢复角膜知觉的临床处理方法通常也较为单一。目前，药物治疗、非手术干预、手术重建是治疗神经营养不良性角膜病变从而促进角膜神经及知觉恢复的治疗方法。其中，药物治疗的主要目的为抗感染及抗炎，同时维持眼表环境稳定，防止角膜进一步损伤。目前，一些新型生物制剂也正在研发及临床试验中，包括富血小板血浆、自体血清及重组人神经生长因子等。非手术干预的主要目的即减少角膜暴露以保护角膜，通常包含治疗性接触镜及医用胶带、肉毒素注射等多种使眼睑下垂遮盖角膜的治疗方式。关于手术重建，除了常规的各类以修复角膜缺损、减少暴露面积为目的的传统术式之外，还包括角膜神经移植术这一定位于改善角膜知觉及角膜神经支配的新术式，其对于由于三叉神经损伤导致角膜上皮下神经纤维缺失的患者来说，是一种较为理想的手术方式。药物治疗、非手术干预、手术重建在临床应用中并不是割裂的。该文总结了以上3类治疗手段的应用进展，以期为未来临床上根据疾病发展的进程及不同的严重程度选择合适的治疗方式、实现角膜知觉的综合性重建提供参考。

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非小细胞肺癌第三代表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂的耐药机制及治疗策略

陆文清, 孟周文理, 虞永峰, 陆舜

2022 (4): 535-544.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.017

摘要 ( 764 )

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表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因是非小细胞肺癌最常见的驱动基因。针对EGFR突变的酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitors，TKIs）是EGFR突变患者的一线治疗首选方案。虽然第一、二、三代TKIs已经广泛应用于临床，但无法避免的继发耐药和部分初治患者的原发耐药，仍旧给长线用药带来了巨大挑战。一代以及二代EGFR-TKIs的耐药机制研究较为清楚，包括T790M突变、MET扩增、ERBB2扩增、IGF1R上调、AXL活化等。第三代TKIs可克服前2代最常见的T790M突变，但是随其在临床应用的日益广泛，耐药问题正引起广泛的重视，相关机制和治疗策略目前仍在研究中。机制分为EGFR依赖性和非依赖性2种，包括靶基因突变、旁路信号通路激活、表型转化、表观遗传调控以及免疫抑制微环境等。第四代TKIs、联合治疗以及免疫治疗等都是潜在的耐药后治疗方式。

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生酮饮食调控肠道菌群在疾病治疗中的研究进展

吴亚, 殷峻

2022 (4): 545-550.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.018

摘要 ( 711 )

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生酮饮食是一种高脂肪、极低碳水化合物、适量蛋白质和其他营养素的饮食模式，最早被用于治疗儿童癫痫。随着医学的不断发展，生酮饮食被逐渐用于其他疾病的辅助治疗，但其具体作用机制尚不明确。最近的研究发现，生酮饮食可影响肠道菌群的多样性和数量，对宿主的健康有着重要的意义。研究表明，生酮饮食可以增加小鼠肠道中的嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila，A. muciniphila）和副拟杆菌的丰度，导致γ-谷氨酰氨基酸生成减少、海马体中γ-氨基丁酸/谷氨酸比值升高，从而降低癫痫的发作频率；A. muciniphila丰度增加还可以改善脑血管功能，降低阿尔茨海默病的发生风险。另外，生酮饮食还可降低小鼠肠道双歧杆菌的丰度，导致肠道乳酸水平下降，从而改善认知和记忆功能；同时，该丰度的下降还可导致具有促炎作用的辅助性T细胞17水平的下降，从而治疗肥胖。基于此，该文就生酮饮食调控肠道菌群在神经系统疾病（包括癫痫、阿尔茨海默病、多发性硬化症、孤独症）、代谢性疾病（包括糖尿病、肥胖）及肿瘤中的治疗作用及可能的机制进行综述。

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1例血红蛋白M病Boston型报道及文献回顾

王也飞, 张悦民, 吴蓓颖, 夏文权

2022 (4): 551-556.
doi: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.04.019

摘要 ( 532 )

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发绀患者，男，29岁，因血氧饱和度低（SaO₂89.3%）而超声心动图和胸片正常就诊。取患者的外周血进行血液学一般检查和溶血相关筛查，高效液相色谱技术（high performance liquid chromatography，HPLC）进行血红蛋白（Hb）分析；采用聚合酶链反应和反向点杂交技术检测17种中国人群常见的β-珠蛋白生成障碍性贫血基因突变和非缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因突变；采用跨越断裂点聚合酶链反应（gap-polymerase chain reaction，Gap-PCR）法结合琼脂糖凝胶电泳技术检测缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因；采用PCR和DNA测序法对α、β珠蛋白基因（HBA1、HBA2与HBB）进行序列分析。患者的血液学一般检查和其他溶血相关检查均无异常发现；HPLC结果显示存在异常Hb 8.1%（位于4.53 min处，S窗），基因分析显示α2-珠蛋白（hemoglobin A2，HBA2）基因c.175C>T，导致α珠蛋白肽链第58位的组氨酸（His）被酪氨酸（Tyr）替换，为杂合型血红蛋白M病（Hb M病）Boston型。Hb M为结构异常的Hb变异体，该异常使血红素铁稳定在氧化状态（Fe³⁺），从而影响Hb的正常释氧功能。该病可能会与引起高铁血红蛋白血症的其他原因混淆，如红细胞高铁血红蛋白还原酶系统的遗传性改变等。该例为中国人群中罕见的Hb M病Boston型，临床呈典型终身发绀表现，预后较好，不需要治疗。

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